スイフトジーン® セレウリド産生セレウス「カイノス」

スイフトジーン®　セレウリド産生セレウス「カイノス」の特徴

セレウリドを産生する生菌の遺伝子（mRNA）を検出
※キットは遺伝子の抽出・増幅・検出試薬を含みます
食材から直接遺伝子を検出、培養不要
※最小検出感度：104cfu/g（食品）
※菌接種試験で確認した食品：
米飯、チャーハン、おから、パスタ
抽出～検出まで約1時間、目視判定
増幅反応の成否をチェック
※インターナルコントロール（IC）ラインで確認します
セレウリド非産生セレウスは検出しません

外観・判定例

IC：インターナルコントロール
r：リファレンス（検出フローの確認）
ces：セレウリド産生セレウス検出　陽性
※ ces強度陽性の場合、ICラインは非常に薄くなる場合があります。

本製品の開発は、厚生労働省の「食品の安全確保推進研究事業」における「食品中の毒素産生食中毒細菌および毒素の直接試験法の研究」の分担研究として実施されました。

セレウスと食中毒

セレウス（Bacillus cereus）は、土壌や河川水、農産物、畜産物、食料、飼料など自然界に広く分布しているグラム陽性、通性嫌気性の桿菌であり、芽胞形成能を有した菌です。

セレウスによる食中毒は、その症状から「嘔吐型」と「下痢型」に大別されますが、日本におけるセレウス食中毒は「嘔吐型」がほとんどであり、その原因食品としては穀物およびその加工品（チャーハンやスパゲティなど）が最も多くなっています。

嘔吐型食中毒の原因となる菌株は、ces遺伝子を有するサブグループに属し、セレウリドと呼ばれる嘔吐毒を産生します。このセレウリド産生セレウス株による食中毒の発症菌量は、食品1gあたり105～108個です。

嘔吐型食中毒の主な症状は嘔吐で、潜伏期間30分～6時間で発症します。一般的に、経過良好で1～2日で回復しますが、まれに急性肝不全などで死亡する事例もあります。

スイフトジーン®　セレウリド産生セレウス「カイノス」の測定原理

A.核酸抽出

界面活性剤と熱により検体中の菌体を破壊し、RNA を抽出します。

B.核酸増幅　　 NASBA法の原理について

核酸増幅法としては、NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) 法を利用して、抽出した RNA 中のces mRNA を増幅します。
ces mRNA に特異的な2種類のプライマーと 3 種類の酵素（逆転写酵素、リボヌクレアーゼH、RNAポリメラーゼ）を用いて、41 ℃ の一定温度下で、鋳型に相補的な 1 本鎖 RNA を増幅します。
プライマー溶液には増幅反応の成否判定用としてインターナルコントロール(IC)のテンプレート及びプライマーが含まれており、検体中の ces mRNA の有無にかかわらず、同一チューブ内で IC の増幅反応が行われます。

C.核酸クロマトグラフィー

ces ラインの検出
ces 増幅産物は、２種類のオリゴ DNA（着色ラテックス標識プローブおよびメンブレン固相プローブ）と配列特異的にサンドイッチハイブリダイゼーションすることで、クロマトストリップ上に青色ラインを形成します。このラインを目視で確認し、検体中のセレウリド産生セレウスの存在の有無を判定します。
ICラインの検出
増幅反応の成否判定用である IC 増幅産物も、IC用の２種類のオリゴ DNA（着色ラテックス標識プローブおよびメンブレン固相プローブ）と配列特異的にサンドイッチハイブリダイゼーションすることで、クロマトストリップ上の ces の検出ラインとは異なる位置で青色ラインを形成します。
増幅反応が阻害された場合、IC と ces の両方のラインが検出されません。
r ラインの検出
ラテラルフロー確認用である赤色ラテックス標識プローブは、メンブレン固相プローブと配列特異的に結合することで、クロマトストリップ上に赤色ラインを形成します。
ラテラルフローが正しく行われなかった場合、r のラインは検出されません。

試薬構成

品番	品名	包装		貯法
GP-6100 (抽出・増幅試薬)	核酸抽出試液	4mL×1	20テスト	2～10℃
	NASBA試液	10回分×2
	プライマー溶液	110μL×1
	NASBA酵素試薬	10回分×2
	NASBA酵素溶解液	60μL×1
	反応用チューブ	20本
GP-6200 (検出試薬)	検出ストリップ	1本×20	20テスト	2～10℃
	展開液	2mL×1
	プレートシール	20枚