FGF-23測定試薬

はじめに

Fibroblast Growth factor (FGF)-23はFGFファミリーに属する分子量約32kDaのタンパク質で227アミノ酸残基から成ります。リン代謝を調節する新規のホルモン様分子として見出されました。
生体内ではN末端側の24残基がシグナルペプチドとして脱落した分泌タンパク質が活性体として存在することが知られています。また、179残基と180残基の間をプロテアーゼが切断し、この部位で切断された断片も生体内に存在します。ただし、活性は消失していると考えられています。

FGF-23の異常が関係する疾患としては、低リン血症性くる病・骨軟化症の研究が進んでいます。
とくに腫瘍性骨軟化症（Tumor-induced osteomalacia; TIO）では責任腫瘍がFGF-23を過剰に産生すること、常染色体優性低リン血症性くる病・骨軟化症（Autosomal dominant hypophosphatem ic rickets/osteomalacia; ADHR）では、上述のプロテアーゼ切断耐性を持つ変異FGF-23タンパク質が産生されることが解明されています。また、X染色体優性低リン血症性くる病（X-linked hypophoshatemic rickets; XLH）でも血中FGF-23濃度が上昇していることが近年解明され、これら3種の疾患はいずれもFGF-23の過剰作用により惹き起こされていると考えられるようになりました。
また、腎不全においても血中のFGF-23濃度の上昇が確認されてきており、新たな疾患領域でのFGF-23の関与についても注目されつつあります。

この度弊社では、モノクローナル抗体を利用したFGF-23測定用研究試薬を開発しました。

特徴

生理活性を持つ全長FGF-23を特異的に検出する。
最小検出感度は3pg/mLであり、高感度である。
測定範囲が広く、3～800pg/mLの定量が可能である。

検体

血清を推奨していますが、血漿も測定可能です。
測定にはなるべく新鮮な血清を使用してください。
検体の保存が必要な場合には、凍結保存し、凍結融解の繰り返しは避けてください。

Q&A

反応原理

抗ヒトFGF-23抗体を感作した抗体固相プレートに試料中のFGF-23を結合させ、さらにPOD標識抗ヒトFGF-23抗体を反応させる。このPODによる発色液の吸光度変化量から、試料中のFGF-23濃度を求める。

試薬構成

No	試薬名	包装
1	抗体固相プレート	96穴
2	酵素標識抗体液	12mL
3	標準液1　0pg/mL	12mL
4	標準液2　10pg/mL	0.5mL
5	標準液3　50pg/mL	0.5mL
6	標準液4　100pg/mL	0.5mL
7	標準液5　250pg/mL	0.5mL
8	標準液6　500pg/mL	0.5mL
9	標準液7　800pg/mL	0.5mL
10	希釈液	12mL
11	発色液	12mL
12	反応停止液(MP試薬と共通)	12mL
13	洗浄原液	53mL
14	プレートシール	3枚

操作方法

Q&A

1) 検体の保存条件
検体はなるべく新鮮な血清を使用してください。やむを得ない場合は、-70℃以下に凍結して保存し、凍結融解の繰り返しは避けてください。尚，検体の安定性については、冷蔵保存13日間で85.5%まで低下することを確認しています。-80℃であれば、約3年間安定ですが，-20℃における安定性については保証しかねます。
また，凍結融解については6回までは影響がないことを確認していますが，凍結融解の繰り返しを避けるためにも、検体を小分けして保存することをお勧めします。

2) 血清及び血漿とも検体として使用できますか
血清及び血漿とも測定可能ですが、血清を用いることを推奨しています

3) 動物検体の測定に使用できますか
マウス、ラット、及びサルの血中FGF-23も測定することができます。

4) 水銀系の防腐剤等が含まれていますか
チメロサール等の水銀系防腐剤は使用しておりません。本製品中の標準溶液、希釈液、酵素標識抗体液及び洗浄原液はケーソンCGを防腐剤として含有しております。

5) 操作上の注意点
検量線は測定毎に作成してください。多検体を測定する場合は、各反応時間を定められた時間に統一するよう注意してください。一次反応はプレートシールをして攪拌しながら反応させるよう注意してください。洗浄操作時には、以下の点に注意してください。
・洗浄液を入れたまま放置しない。
・ウェル内の洗浄水を十分切った後、すぐに次の操作に移ること。