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1) あらかじめ検体からRNAを抽出します。検体からのRNA抽出には、各施設で使用されているRNA試薬(EXTRAGENⅡ等)を使用してください。 |
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2) NASBA試薬1チューブにプライマー溶液を120μL加え、直ちにvortexにて十分に溶解してください |
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3) 付属の0.5mLチューブにNASBA試液を5μLずつ分注してください。 |
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4) 1)検体の前処理で得た抽出RNAを2.5μLずつ各チューブに分注します。分注後、軽くタッピングし、軽く遠心します。 |
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5) 各チューブをヒートブロック(65℃)で5分間保温します。 |
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6) 保温後、ヒートブロック(41℃)で5分間保温します。
尚、この保温中にNASBA酵素液を調製してください。 |
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7) NASBA酵素試薬に55μLの精製水を加え、10秒程度待ってから軽く叩く等して溶解・混和してください。 |
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8) 各チューブをヒートブロックに入れた状態のまま、NASBA酵素液を2.5μLずつ添加し、4,5回ピペッティングします。 |
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9) ヒートブロック(41℃)で90分間保温します。 |
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10) 増幅反応終了後のチューブに、展開液を3滴滴下してください。 |
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11) チューブに検出ストリップを入れて、3回出し入れを行ってください。 |
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12) チューブに検出ストリップを入れてから20分後に、そのまま結果を判定してください。 |
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判定例 |
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メンブレン上の別々の位置にGⅠ及びGⅡ遺伝子捕捉用オリゴプローブを固相化しており、1回の検出でノロウイルスの遺伝子群を識別します。 |
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