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試薬 |
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1) |
プライマー（2種） |
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標的RNAに相補的なオリゴヌクレオチド |
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アンチセンスプライマー5'側にT7 RNA polymerase配列付加 |
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5’-AAT TCT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GAG-3’ |
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2) |
Nuclease-free water： NASBA酵素試薬溶解用 |
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器具 |
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1) |
0.5mL マイクロチューブ（RNase-free） |
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2) |
ヒートブロック(65℃, 41℃) |
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3) |
ピペットマン等 |
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4) |
フィルターチップ |
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5) |
ボルテックスミキサー |
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6) |
卓上遠心器 |
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1) |
NASBA溶解液へ2種類プライマー添加 (各0.4μM) 60μL |
0.4μM×100μL／*μM= μL * プライマーストック液濃度 |
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2) |
1)添加，NASBA試薬溶解（NASBA反応試薬調製） |
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3) |
2)NASBA反応試薬分注 |
10μL/本×5 本 |
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4) |
検体（RNA溶液）添加 |
5μL/本 |
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5) |
インキュベーション（変性） |
65℃，5分 |
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6) |
インキュベーション（アニーリング） |
41℃，5分 |
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7) |
6)インキュベーション中に酵素試薬溶解 |
30-55μL water/本 |
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8) |
7)酵素試薬添加（*温度低下注意） |
5μL/tube |
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9) |
インキュベーション（増幅反応） |
41℃，90分 |
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10) |
反応終了後，検出までNASBA産物保存 |
-20℃以下 |
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