NASBA Amplification キット
試薬 | |
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1 | プライマー(2種) 標的RNAに相補的なオリゴヌクレオチド アンチセンスプライマー5'側にT7 RNA polymerase配列付加 5’-AAT TCT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GAG-3’ |
2 | Nuclease-free water:NASBA酵素試薬溶解用 |
器具 | |
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1 | 0.5mL マイクロチューブ(RNase-free) |
2 | ヒートブロック(65℃, 41℃) |
3 | ピペットマン等 |
4 | フィルターチップ |
5 | ボルテックスミキサー |
6 | 卓上遠心器 |
1 | NASBA溶解液へ2種類プライマー添加 (各0.4μM) 60μL | 0.4μM×100μL/*μM= μL * プライマーストック液濃度 |
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2 | 1)添加,NASBA試薬溶解(NASBA反応試薬調製) | |
3 | 2)NASBA反応試薬分注 | 10μL/本×5 本 |
4 | 検体(RNA溶液)添加 | 5μL/本 |
5 | インキュベーション(変性) | 65℃,5分 |
6 | インキュベーション(アニーリング) | 41℃,5分 |
7 | 6)インキュベーション中に酵素試薬溶解 | 30-55μL water/本 |
8 | 7)酵素試薬添加(*温度低下注意) | 5μL/tube |
9 | インキュベーション(増幅反応) | 41℃,90分 |
10 | 反応終了後,検出までNASBA産物保存 | -20℃以下 |